E2F integriert den Zellzyklusfortschritt mit DNA-Reparatur, Replikation und G2/M-Kontrollpunkten

Die E2F-Transkriptionsfaktor-Familie ist bekannt dafür, eine Schlüsselrolle bei der zeitgerechten Expression von Genen zu spielen, die für den Zellzyklusfortschritt und die Proliferation erforderlich sind, doch nur wenige E2F-Zielgene wurden identifiziert. Wir untersuchten die Möglichkeit, dass E2F-Regulatoren eine breitere Rolle spielen, indem wir zusätzliche Gene identifizierten, die in lebenden menschlichen Zellen von E2F gebunden sind. Ein Protokoll wurde entwickelt, um genomische Bindungsstellen für DNA-bindende Faktoren in Säugetierzellen zu identifizieren, das die Immunpräzipitation von quergeschnittenen Protein-DNA-Komplexen mit DNA-Mikroarrays kombiniert. Unter ungefähr 1200 Genen, die während des Eintritts in den Zellzyklus exprimiert werden, fanden wir, dass die Promotoren von 127 in primären Fibroblasten vom E2F4-Transkriptionsfaktor gebunden wurden. Eine Teilmenge dieser Zielgene wurde auch von E2F1 gebunden. Die meisten zuvor identifizierten Zielgene, von denen bekannt ist, dass sie Rollen in der DNA-Replikation und der Zellzykluskontrolle haben und die auf dem Mikroarray dargestellt sind, wurden durch diese Analyse bestätigt. Wir identifizierten auch eine bemerkenswerte Gruppe von Genen ohne vorherige Verbindung zur E2F-Regulation, einschließlich Gene, die Komponenten der DNA-Schaden-Kontrollpunkte und Reparaturwege kodieren, sowie Faktoren, die an der Chromatinassemblierung/-kondensation, der Chromosomensegregation und dem mitotischen Spindel-Kontrollpunkt beteiligt sind. Unsere Daten deuten darauf hin, dass E2F den Zellzyklusfortschritt direkt mit der koordinierten Regulation von Genen verknüpft, die sowohl für die Synthese von DNA als auch für deren Überwachung unerlässlich sind.