EEA1, ein mit frühen Endosomen assoziiertes Protein.

Frühe Endosomen sind zelluläre Kompartimente, die endozytotisiertes Material empfangen und es für den vesikulären Transport zu späten Endosomen und Lysosomen oder für das Recycling zur Plasmamembran sortieren. Wir haben ein menschliches cDNA kloniert, das ein evolutionär konserviertes 180-kDa-Protein auf frühen Endosomen kodiert, das EEA1 (Early Endosome Antigen1) genannt wird. EEA1 ist mit frühen Endosomen assoziiert, da es durch Immunfluoreszenz mit dem Transferrinrezeptor und mit Rab5 ko-lokalisiert, jedoch nicht mit Rab7. Die Immun-Elektronenmikroskopie zeigt, dass es mit tubulovesikulären frühen Endosomen assoziiert ist, die internalisiertes Rinderserumalbumin-Gold enthalten. EEA1 ist ein hydrophiles peripheres Membranprotein, das im Zytosol und Membranfraktionen vorhanden ist. Es partitioniert in die wässrige Phase nach Triton X-114-Löslichkeit und wird aus Membranen durch 0,3 M NaCl extrahiert. Es ist ein überwiegend alpha-helikales Protein, das 17-20% Sequenzidentität mit den Myosinen teilt und ein calmodulinbindendes IQ-Motiv enthält. Es wird von metallbindenden Cystein „Finger“-Motiven flankiert. Die COOH-terminale Finger, Cys-X2-Cys-X12-Cys-X2-Cys und Cys-X2-Cys-X16-Cys-X2-Cys, sind innerhalb eines Bereichs vorhanden, der auffallend homolog ist zu Saccharomyces cerevisiae FAB1-Protein, das für die Endozytose notwendig ist, und zu Caenorhabditis elegans ZK632. Diese Finger zeigen auch eine begrenzte Erhaltung mit den S. cerevisiae VAC1-, Vps11- und Vps18p-Proteinen, die am vakuolaren Transport beteiligt sind. Wir schlagen vor, dass EEA1 für den vesikulären Transport von Proteinen durch frühe Endosomen erforderlich ist und dass seine Finger-Motive für diese Aktivität notwendig sind.