Inter- und Intraspezies-Identifikation von Bartonella (Rochalimaea) Arten

Arten der Gattung Rochalimaea, die kürzlich in Bartonella umbenannt wurde, sind von wachsendem medizinischem Interesse. Bartonella quintana wurde als Ursache für Schützengrabenfieber, Endokarditis und bakterielle Angiomatosis berichtet. B. henselae wurde mit Symptomen und Infektionen bei HIV-infizierten Patienten in Verbindung gebracht, wie Fieber, Endokarditis und bakterielle Angiomatosis, und ist an der Ätiologie der Katzenkratzkrankheit beteiligt. Ein so breites Spektrum an Infektionen macht es notwendig, ein Intraspezies-Identifikationswerkzeug zu erhalten, um epidemiologische Studien durchzuführen. B. vinsonii, B. elizabethae, sieben Isolate von B. quintana und vier Isolate von B. henselae wurden nach Restriktion mit den selten schneidenden Endonukleasen NotI, EagI und SmaI durch Pulsfeld-Gelelektrophorese (PFGE) untersucht. Für jede der vier Bartonella-Arten wurden spezifische Profile erhalten. Der Vergleich der genomischen Fingerabdrücke von Isolaten derselben Art zeigte Polymorphismus in den DNA-Restriktionsmustern, und es wurde ein spezifisches Profil für jedes Isolat erhalten. Eine phylogenetische Analyse der B. quintana-Isolate wurde unter Verwendung des Dice-Koeffizienten, UPGMA (unweighted pair-group method of arithmetic averages) und der Programmierung durch das Philip-Paket durchgeführt. Die Amplifikation durch PCR und anschließende Sequenzierung unter Verwendung eines automatisierten laserfluoreszierenden DNA-Sequenziergeräts (Pharmacia) wurde im intergenen Spacer-Bereich (ITS) zwischen den 16- und 23S rRNA-Genen durchgeführt. Es wurde festgestellt, dass jedes B. henselae-Isolat eine spezifische Sequenz aufwies, während die B. quintana-Isolate nur in zwei Gruppen fielen. Als eine Endonuklease-Restriktionsanalyse des ITS-PCR-Produktes durchgeführt wurde, ermöglichten drei Enzyme, TaqI, HindIII und HaeIII, die Artenidentifikation von Bartonella spp. Die Restriktionsfragmentlängenpolymorphismus nach PCR-Amplifikation des 16S-23S rRNA-Gen ITS könnte nützlich sein für eine schnelle Artenidentifikation, und PFGE könnte eine effiziente Methode zur Identifizierung von Isolaten sein.