Klonierung, Charakterisierung und Sequenzierung eines Accessory Gene Regulators (agr) in Staphylococcus aureus

Wir haben zuvor ein Gen in Staphylococcus aureus, agr, identifiziert, dessen Aktivität für die hochgradige post-exponentielle Phase der Expression einer Reihe von sekretorischen Proteinen erforderlich ist. In diesem Papier beschreiben wir die Klonierung dieses Gens in Escherichia coli unter Verwendung eines eingefügten Transposons (Tn551) als Klonierungsprobe. Das klonierte Gen besteht aus einem offenen Leserahmen mit 241 Kodons, der die Stelle der Transposon-Einfügung enthält, und wurde in einen S. aureus Vektor, pSK265, zurückkloniert und in S. aureus als funktionell nachgewiesen. Die Aktivität wurde durch Bestimmungen der Alpha-Hämolysin-, Beta-Hämolysin- und Toxin-1-Produktion des toxischen Schocksyndroms in Kulturen der frühen stationären Phase bewertet. Das klonierte Gen wies im Vergleich zum chromosomalen agr-Determinanten eine erhebliche Variation in Bezug auf verschiedene Exoproteine und verschiedene Wirtsstämme auf; diese Variation konnte nicht auf die höhere Kopienzahl des klonierten Gens zurückgeführt werden und spiegelt wahrscheinlich subtile Unterschiede im regulatorischen System wider.