Eine allgemeine Methode zur Einführung von Enzymen mittels immunoglobulinbeschichteter Liposomen in Lysosomen defizienter Zellen.

Phagozyten des glatten Hundhais (Mustelus canis) enthalten kein endogenes Peroxidase in ihren Lysosomen und stellen Modelle für Zellen dar, die genetisch in lysosomalen Enzymen wie Myeloperoxidase defizient sind. Wir haben eine Aufnahme von über 50 % exogener Meerrettichperoxidase erreicht, sofern das Enzym den Zellen nach der Incorporation in mit warmaggregiertem (62 Grad, 10 Minuten) isologen IgM beschichteten Liposomen vorgestellt wird. Die Einfangung von Meerrettichperoxidase (EC 1.11.1.7) durch Liposomen wurde durch chromatographische Trennung (Sephadex G-200; Sepharose 2B und 4B) des freien Enzyms von dem, das mit Liposomen assoziiert ist, nachgewiesen; liposomenassoziierte Meerrettichperoxidase, zusammen mit eingefangenen Markern des wässrigen Kompartiments (Glukose, CrO4=), wurden ausgeschlossen, und freies Enzym sowie Marker wurden zurückgehalten. Die Einfangung von Enzym und Marker war nicht elektrostatistisch, variierte mit dem molaren Verhältnis der geladenen Membrankomponenten und wurde durch Detergenzlyse (Triton X-100) von Liposomen umgekehrt. Die Aufnahme bei 30 Grad von aggregierten, mit IgM beschichteten Liposomen, die gefangene Meerrettichperoxidase enthalten, überstieg die von freiem Enzym um das 100-fache und war effizienter als die Aufnahme von Meerrettichperoxidase, die in unbeschichteten Liposomen oder in mit nativen IgM beschichteten Liposomen präsentiert wurde. Nach der Phagozytose wurden peroxidase-reiche Liposomen ausschließlich in Lysosomen der Phagozyten durch ultrastrukturelle Histochemie lokalisiert; das Enzym zeigte über 50 % Latenz zur osmotischen Lyse. Diese Methode könnte sich als allgemein nützlich erweisen, um exogene Enzyme an phagozytische Zellen bereitzustellen, die genetisch in lysosomalen Hydrolasen defizient sind.