Molekulare Gewichtformen der corneal Aldehyd dehydrogenase

Aldehyd dehydrogenase wurde kürzlich als eines der Hauptlöslichen Proteine in der Säugetierhornhaut identifiziert. Das Enzym hat ein Subeinheitsmolekulargewicht von 54 kd, und Gel-Filtrationsexperimente zeigen, dass ein Dimer-Molekül die enzymatisch aktive Spezies ist. Das Ziel der hier beschriebenen Studien war es zu untersuchen, ob oligomere Formen dieses Enzyms ebenfalls mit der viel schnelleren SDS-PAGE-Mini-Gelelektrophorese-Technik in Kombination mit Immunblotting und "in gel" Enzymnachweis detektiert werden können. Die Behandlung der Proben bei niedriger Temperatur vor der Elektrophorese zeigte, dass sowohl menschliche als auch bovine corneale ALDH hauptsächlich als 54 kd und als Dimer-Molekül mit einem scheinbaren Molekulargewicht von 88 kd vorhanden sind. Bovine corneale ALDH enthielt auch größere Oligomere mit einem Molekulargewicht von 110, 154 und 210 kd. Das klassische 3-Minuten-Kochverfahren vor der SDS-PAGE dissoszierte die Oligomere in die 54 kd Untereinheit. Zymographie-Experimente zeigten, dass die Enzymaktivität nur in der 88 kd Form der cornealen ALDH vorhanden war. Der Vorbehandlungsprozess der cornealen ALDH bei verschiedenen Temperaturen zeigte, dass der temperaturinduzierte Wechsel der 88 kd Spezies zur 54 kd Untereinheit parallel zur Abnahme der enzymatischen Aktivität verlief. Die Tatsache, dass die Reduktion der Proben mit DTT die 88 kd Form nicht dissoszierte, deutet darauf hin, dass die Bildung von Disulfidbrücken nicht an der Oligomerisation der cornealen ALDH beteiligt ist.