Isolation amplifizierter DNA-Sequenzen aus IMR-32 menschlichen Neuroblastomzellen: Erleichterung durch fluoreszenzaktivierte Durchflusszytometrie von Metaphasechromosomen.

Die menschlichen Neuroblastom IMR-32 Zellen weisen große homogene Färbungsregionen (HSRs) auf, hauptsächlich in den kurzen Armen von Chromosom 1. Wir haben eine rekombinante Phagenbibliothek konstruiert, die für die DNA, die in den HSR dieses Chromosoms vorhanden ist, angereichert ist, indem wir fluoreszenzaktivierte Durchflusszytometrie zur anfänglichen Chromosomenreinigung verwendet haben. Elf distinct klonierte DNA-Segmente wurden identifiziert, die signifikant stärkere Hybridisierung mit der IMR-32 genomischen DNA zeigten, festgestellt durch Southern Blotting, als mit normaler menschlicher genomischer DNA. Diese Sequenzen wurden auch mit Hilfe der in situ Hybridisierung den HSR von Chromosom 1 lokalisiert. Basierend auf einer ungefähr 50-fachen Sequenzamplifizierung für jedes klonierte Segment und einer Gesamtgröße des HSR von 150.000 Kilobasen wird die amplifizierte Einheit im HSR auf 3.000 Kilobasen geschätzt. Sequenzen, die homolog zu allen klonierten HSR DNA-Segmenten sind, wurden unter Verwendung menschlich-maus Hybridzellen auf das menschliche Chromosom 2 kartiert. Weitere Arbeiten mit in situ Hybridisierung zeigten, dass klonierte HSR-Segmente im kurzen Arm von Chromosom 2 sowohl in normalen als auch in IMR-32 Zellen lokalisiert waren. Daher könnte die Amplifikation dieser Sequenzen in IMR-32 Zellen einen Transpositionsprozess vom Chromosom 2 zum Chromosom 1 umfasst haben.