Klonale Herkunft von murinen hämatopoetischen Kolonien mit offensichtlicher Einschränkung auf Granulozyt-Makrophagen-Megakaryozyten (GMM) Differenzierung

Wir charakterisierten murine hämatopoetische Kolonien, die aus Granulozyten, Makrophagen, Megakaryozyten und Blastenzellen bestehen, jedoch erythroide Elemente vermissen lassen. Mausmark- oder Milzzellen wurden in Methylzellulose-Medien in Anwesenheit von 10 % (v/v) pokeweed-Mitogen-stimulierten Milzzell-bedingten Medium (PWM-SCM) und 2 Einheiten/ml Erythropoietin für 8 Tage kultiviert. Granulozyt-Makrophagen-Megakaryozyten (GMM) Kolonien konnten von Granulozyt-Erythrozyt-Makrophagen-Megakaryozyten (GEMM) Kolonien unterschieden werden, da erstere das typische Erscheinungsbild von Burst mit roter Farbe vermissen ließen. Die Analyse von Y-Chromosomen in Mischexperimenten mit männlichen und weiblichen Markzellen bestätigte die klonale Natur der GMM-Kolonien. Differentialzählungen der GMM-Kolonien ergaben variierende, jedoch signifikante Zahlen von Blastenzellen in allen Tag-8 und Tag-12 Kolonien und in sieben von zehn Tag-14 GMM-Kolonien. Im Allgemeinen waren die Prozentsätze der Blastenzellen invers mit der Inkubationsdauer in Kultur korreliert. Replating-Experimente bestätigten das Fehlen von späten erythroiden Vorläufern wie CFU-E und Normoblasten in allen der 50 Tag-8 GMM Kolonien. Allerdings enthielten sechs der 50 GMM-Kolonien frühe Vorläufer, die in der Lage waren, erythroide Expression zu zeigen, wie BFU-E, CFU-EM, CFU-GEM und CFU-GEMM. Im Gegensatz dazu konnten die drei Tag-14 GMM-Kolonien, die keine Blastenzellen zeigten, keine sekundären Kolonien produzieren. Während die Vorläufer für die letzteren Kolonien also auf Granulozyt-Makrophagen-Megakaryozyten-Differenzierung beschränkt sind, könnten einige der scheinbaren GMM-Kolonien, die Blastenzellen enthalten, von frühen Vorläufern stammen, die pluripotenten Stammzellen nahe stehen. Detaillierte zytologische Analysen und Replating-Experimente sind notwendig zur Charakterisierung der wahren Differenzierungspotentiale von gemischten Kolonien in Kultur.