Messung der Apolipoprotein A-I-Konzentration im Serum von nichtmenschlichen Primaten mittels enzymgebundenem Immunosorbens-Assay (ELISA).

Ein sensibler und spezifischer enzymgebundener Immunosorbens-Assay (ELISA) für Apolipoprotein A-I (apoA-I) im Serum von nichtmenschlichen Primaten wird beschrieben. Der Assay ist ein nichtkompetitiver Sandwich-ELISA, bei dem Polystyrol-Mikrotiterplatten mit gereinigten, monospezifischen Ziegen-Anti-Monkey-apoA-I-Antikörpern beschichtet wurden. Die Serumproben wurden in die beschichteten Wells gegeben, inkubiert und nach dem Waschen wurden Antikörper, die mit Meerrettich-Peroxidase konjugiert sind, hinzugefügt. Nach weiteren Waschschritten wurde das gebundene Label bestimmt. Ein Hitzebehandlungsschritt von 52 Grad C für 3 Stunden wurde verwendet, um die immunreaktiven Stellen von apoA-I im verdünnten Serum zu maximieren. Serumproben, die mit Chloroform-Methanol extrahiert, mit Tetramethylharnstoff delipidiert oder durch Erhitzen denaturiert wurden, führten zu im Wesentlichen äquivalenten Ergebnissen. Der Arbeitsbereich der apoA-I-Standards lag zwischen 0,5 und 5 ng, und es wurden parallele Reaktionen für apoA-I im Serum, in isoliertem HDL und in Puffer als gereinigtes Apoprotein beobachtet. Die Wiedergewinnung von apoA-I, das dem Serum hinzugefügt wurde, war quantitativ (106 +/- 3%). Die intra- und interassay Variationskoeffizienten betrugen 6,2% bzw. 6,9%. Der enzymatische Immunassay ergab Werte, die günstig mit denen aus der radialen Immunodiffusion verglichen wurden (r = 0,84). Die ApoA-I-Konzentration im Serum von afrikanischen grünen Affen war hoch korreliert mit der HDL-Cholesterinkonzentration (r = 0,86). Es wird geschlossen, dass dieser ELISA eine genaue und präzise Methode zur Bestimmung der apoA-I-Konzentrationen im Serum von Primaten darstellt.