Key points are not available for this paper at this time.
Thymidylatsynthetase (TS) und Dihydrofolatreduktase (DHFR) in Leishmania tropica existieren als bifunktionales Protein. Durch die Verwendung eines methotrexatresistenten Stammes, der das bifunktionale Enzym überproduziert, wurde das Protein 80-fach reinigt, bis es apparente Homogenität in zwei Schritten erreichte. Das native Protein hat ein apparentes Molekulargewicht von 110.000 und besteht aus zwei Untereinheiten mit identischer Größe und Ladung. Vorliegende Daten deuten darauf hin, dass jede der Untereinheiten TS und DHFR besitzt. Die TS des bifunktionalen Proteins bildet einen kovalenten 5-Fluoro-2'-deoxyuridylat (FdUMP)-(+/-)-5,10-Methylenetetrahydrofolat-Enzymkomplex, in dem 2 Mol FdUMP pro Mol Enzym gebunden sind. Im Gegensatz dazu deutete die Titration von DHFR mit Methotrexat darauf hin, dass nur 1 Mol des Inhibitors pro Mol dimere Enzym gebunden ist. Sowohl die TS- als auch die DHFR-Aktivitäten des bifunktionalen Enzyms wurden durch das Sulfhydryl-Reagenz N-Ethylmaleimid inaktiviert. Substrate der einzelnen Enzyme boten Schutz gegen die Inaktivierung, was darauf hindeutet, dass jedes Enzym mindestens eine Cystein für die katalytische Aktivität benötigt. Kinetische Beweise deuten darauf hin, dass der Großteil, wenn nicht gar alle, der durch TS produzierten 7,8-Dihydrofolate schneller zu DHFR geleitet wird, als dass es in das Medium freigesetzt wird. Obwohl der Mechanismus der Kanalbildung unbekannt ist, wurde die Möglichkeit ausgeschlossen, dass die beiden Enzyme eine gemeinsame Folsäurebindungsstelle teilen.
Meek et al. (Tue,) untersuchten diese Frage.