Die hydrophile Domäne von kleinem Ankyrin-1 interagiert mit den zwei N-terminalen Immunglobulindomänen von Titin

Es ist wenig über die Mechanismen bekannt, die die internen Membransysteme in eukaryotischen Zellen organisieren. Wir beschäftigen uns mit dieser Frage in quergestreifter Muskulatur, die zwei neuartige Systeme interner Membranen enthält, die Querkanälchen und das sarkoplasmatische Retikulum (SR). Kleines Ankyrin-1 (sAnk1) ist ein etwa 17-kDa Transmembranprotein des SR, das sich um die Z-Scheiben und M-Linien jedes Sarkomers konzentriert. Wir haben den Hefe-Zwei-Hybrid-Assay verwendet, um zu bestimmen, ob sAnk1 mit Titin interagiert, einem riesigen myofibrillären Protein, das das Sarkomer organisiert. Wir fanden heraus, dass die hydrophile zytoplasmatische Domäne von sAnk1 mit den beiden am weitesten N-terminalen Ig-Domänen von Titin, ZIg1 und ZIg2, interagierte, die in situ an der Z-Linie vorhanden sind. Sowohl ZIg1 als auch ZIg2 waren für die Bindungsaktivität erforderlich. sAnk1 interagierte nicht mit anderen Sequenzen von Titin, die die Z-Scheibe überspannen, oder mit Ig-Domänen von Titin in der Nähe der M-Linie. Titin ZIg1/2 banden auch T-cap/Telethonin, ein 19-kDa Protein der Z-Linie. Wir zeigen, dass Titin ZIg1/2 einen Dreifachkomplex mit sAnk1 und T-cap bilden kann. Unsere Ergebnisse deuten darauf hin, dass Titin ZIg1/2 sAnk1 in Muskelhomogenaten binden kann und schlagen eine Rolle für diese Proteine bei der Organisation des SR um das kontraktile Apparat an der Z-Linie vor.