Entwurf von TATA-Box-bindenden Protein/Zinkfinger-Fusionen zur gezielten Regulation der Genexpression

Die Fusion des TATA-Box-bindenden Proteins (TBP) mit anderen DNA-bindenden Domänen könnte einen leistungsstarken Ansatz zur gezielten Anbindung von TBP an bestimmte Promotoren bieten. Um diese Möglichkeit zu erkunden, wurde eine strukturbasierte Entwurfsstrategie verwendet, um ein Fusionsprotein, TBP/ZF, zu konstruieren, bei dem die drei Zinkfinger von Zif268 mit dem COOH-Terminus von Hefe-TBP verknüpft wurden. Gelshift-Experimente zeigten, dass dieses Fusionsprotein einen außergewöhnlich stabilen Komplex bildete, wenn es an die entsprechende komposite DNA-Stelle gebunden war (Halbwertszeit von bis zu 630 Stunden). In-vitro-Transkriptionsexperimente und transiente Cotransfektionstests zeigten, dass TBP/ZF als ortsspezifischer Repressor wirken konnte. Da die DNA-bindenden Spezifitäten von Zinkfinger-Domänen systematisch durch Phagenanzeige verändert werden können, könnte es möglich sein, solche TBP/Zinkfinger-Fusionen auf gewünschte Promotoren zu richten und somit die Expression endogener Gene spezifisch zu regulieren.