Molekulare Klonierung und Expression von Campylobacter pylori-spezifischen Antigenen in Escherichia coli K-12

Eine Genbank von Campylobacter pylori-DNA in Escherichia coli wurde durch Klonierung von mit Sau3A geschnittenen DNA-Fragmenten in den Bakteriophagen-Vektor lambda EMBL3 erstellt. Die Expression von C. pylori-Antigenen wurde bestimmt, indem die Genbibliothek mit adsorbierten C. pylori-Ganzzellen-Kaninchen-Antisera gescreent wurde. Ein rekombinanter Klon, der positiv reagierte (lambda CP2), wurde weiter untersucht. Die Immunblotanalyse mit lambda CP2 zeigte ein Polypeptidband von 66 Kilodalton (kDa), das antigen reagierte mit dem adsorbierten Antiserum. Die Extraktion von DNA aus lambda CP2 und die Verdauung mit SalI zeigten einen DNA-Insert von 17 Kilobasen (kb). Subklonierung mit SalI und dem E. coli-Vektor pUC18 ergab, dass die DNA auch ein 31-kDa-Antigen kodierte. Die klonierten Antigene wurden durch Immunoblotting als gleiches Molekulargewicht in E. coli wie in C. pylori nachgewiesen und waren in allen C. pylori-Stämmen vorhanden. Antiserum wurde gegen die klonierten Polypeptide erzeugt und reagierte nur mit C. pylori, als es durch Dot-Blotting und indirekte Immunofluoreszenz analysiert wurde. Die klonierten Antigene wurden als aus dem pUC18 lac-Promotor exprimiert identifiziert. Die DNA, die diese Antigene kodiert, wurde mit 32P radioaktiv markiert und stellte sich als Hybridisierung nur mit C. pylori-Stämmen heraus. Immunblotting mit affin-purifiziertem polyklonalem Antikörper gegen das Ureaseenzym von C. pylori zeigte, dass die klonierten Antigene möglicherweise Teil des Ureaseenzyms sind.