Charakterisierung von Stat5a- und Stat5b-Homodimeren und Heterodimeren sowie deren Assoziation mit dem Glukokortikoidrezeptor in Brustzellen

Die laktogenen Hormone, d.h. Prolaktin und Glukokortikoide, wirken zusammen, um Transkriptionsfaktoren zu stimulieren, die für die hormonabhängige Expression von Milchprotein-Genen verantwortlich sind. In der Brustdrüse aktiviert Prolaktin Stat5a und Stat5b, während Glukokortikoide den Glukokortikoidrezeptor (GR) aktivieren. Immunpräzipitationsversuche zeigten, dass Stat5a, Stat5b und der GR in Brustzellen in vivo physisch assoziiert sind. Die Assoziation hängt nicht von der Behandlung mit laktogenen Hormonen ab und ist in allen Phasen der Entwicklung der Brustdrüse evident. Immun-Depletionsversuche deuteten darauf hin, dass ein Teil der GR- und Stat5-Proteine nicht assoziiert ist, was darauf hindeutet, dass es unterschiedliche intrazelluläre Pools dieser Proteine gibt. Die Behandlung von HC11-Brustzellen mit laktogenen Hormonen führte zur Tyrosin-Phosphorylierung von Stat5a und Stat5b, zur Dimerisierung und zur schnellen nukleären Translokation beider Stat5-Proteine. Nach der Hormonanwendung wurden Stat5a-Stat5b-Heterodimere durch ihre Co-Immunpräzipitation nachgewiesen. Darüber hinaus zeigten Immun-Depletionsversuche gefolgt von Gelverschiebungsanalysen die Anwesenheit aktiver Stat5a- und Stat5b-Homodimere. In Brustzellen sind Stat5b-Homodimere weniger verbreitet als Stat5a-Homodimere. Obwohl der GR nicht direkt an die Stat5-DNA-Bindungsstelle bindet, konnte er mit dem Stat5-DNA-Komplex nachgewiesen werden. Diese Ergebnisse deuten darauf hin, dass Glukokortikoide die Milchprotein-Genexpression über die Assoziation des GR mit Stat5 beeinflussen. Somit besteht eine funktionale Kopplung zwischen statabhängiger und nuklearen Hormonrezeptor-abhängiger Gentranskription.