Inhibition der endogenen Expression des Wachstumsfaktors für das Bindegewebe durch sein Antisense-Oligonukleotid und Antisense-RNA hemmt die Proliferation und Migration von vaskulären Endothelzellen

Zuvor haben wir ein mRNA kloniert, das überwiegend in hypertrophen Chondrozyten durch differentielle Display-PCR aus einer menschlichen chondrosarkom-abgeleiteten chondrozytischen Zelllinie (HCS-2/8) exprimiert wird und identisch mit dem des Wachstumsfaktors für das Bindegewebe (CTGF) ist. In der vorliegenden Studie haben wir die Rollen von CTGF in der Proliferation und Migration von vaskulären Endothelzellen unter Verwendung seines Antisense-Oligonukleotids und Antisense-RNA untersucht, da die Angiogenese in die hypertrophe Zone des Knorpels im letzten Schritt der enchondralen Ossifikation erfolgt. Immunhistochemische und immunfluoreszenztechnische Techniken zeigten, dass nicht nur hypertrophe Chondrozyten, sondern auch Endothelzellen in den Kosten-Chondral-Junktionen der Mäuserippen in vivo mit einem anti-CTGF-Antikörper gefärbt wurden. Norther-Blot-Analysen ergaben, dass CTGF stark in chondrozytischen Zellen sowie in kultivierten bovinen Aorta-Endothel (BAE)-Zellen exprimiert wurde, jedoch nicht in anderen Zelltypen wie osteoblastischen Zellen. Seine Expression in BAE-Zellen war in der Wachstumsphase größer als in der konfluente Phase. Als die Hälfte einer Monolayer-Kultur von konfluente BAE-Zellen abgezogen wurde, waren nur die Zellen, die sich in den freien Bereich proliferierten und ausdehnten, mit dem anti-CTGF-Antikörper gefärbt. Die Zugabe eines Antisense-Oligonukleotids hemmte die Proliferation und Ausdehnung der BAE-Zellen in den freien Bereich. Das Antisense-Oligonukleotid hemmte auch die Proliferation von BAE-Zellen in der schnell proliferierenden Phase. In einem Boyden-Kammer-Assay hemmte eine Vorbehandlung mit dem Antisense-Oligonukleotid die Migration von BAE-Zellen erheblich. Darüber hinaus waren die Fähigkeiten zur Proliferation und Migration von BAE-Zellen, die stabil mit Expressionsvektoren transgen [Antisense-RNA von CTGF-cDNA] transfiziert wurden, erheblich geringer als die der Kontrolle. Diese Ergebnisse deuten darauf hin, dass die endogene CTGF-Expression an der Proliferation und Migration von BAE-Zellen beteiligt ist.