Auswirkungen der Kryokonservierung auf Tetramere, Zytokin-Flow-Zytometrie und ELISPOT

HINTERGRUND: Die Kryokonservierung von PBMC und/oder derovernacht Versand von Proben sind für viele klinische Studien erforderlich, trotz ihrer potenziell nachteiligen Auswirkungen auf Immunüberwachungsassays wie MHC-Peptid-Tetramerfärbung, Zytokin-Flow-Zytometrie (CFC) und ELISPOT. In dieser Studie verglichen wir die Leistung dieser Assays an leukapheresierten PBMC, die über Nacht in Medium versandt wurden, mit kryokonservierten PBMC von passenden Spendern. ERGEBNISSE: Bei der Stimulation mit einem CMV pp65-Peptidpool oder der Färbung mit pp65 HLA-A2-Tetrameren gab es eine signifikante Korrelation zwischen versandten und kryokonservierten Proben für jeden Assay (p < 0,001). Die Unterschiede in der Antwortstärke zwischen kryokonservierten und versandten PBMC-Proben waren für die meisten Antigene und Assays nicht signifikant. Es wurde eine signifikante Korrelation zwischen CFC und ELISPOT-Assays unter Verwendung der pp65-Peptidpool-Stimulation in sowohl versandten als auch kryokonservierten Proben beobachtet (p < 0,001). Eine starke Korrelation wurde zwischen CFC (unter Verwendung der HLA-A2-restriktiven pp65-Peptidstimulation) und Tetramerfärbung beobachtet (p < 0,001). Ähnlich sensible und spezifische Messergebnisse wurden zwischen den drei Assays und zwischen versandten und kryokonservierten Proben für jeden Assay festgestellt. SCHLUSSFOLGERUNG: Wir schließen daraus, dass alle drei Assays konsistente Ergebnisse zwischen versandten und kryokonservierten Proben zeigen, wenn ein peptidbasiertes Ergebnis verwendet wird. Die Assays sind auch in paarweisen Vergleichen mit äquivalenten Antigensystemen untereinander konsistent.