Zwei Klassen primitiver pluripotenter hämatopoetischer Vorläuferzellen: Trennung durch Adhäsion

Methylcellulosekulturen, die Mausmarkzellen in niedrigen Dichten und teilweise gereinigte Präparate von Erythropoietin und Interleukin-3 enthielten, wurden nach 2 Wochen auf das Vorhandensein makroskopischer multilinearer Kolonien (von "primären" CFU-macro GEMM) ausgewertet. Die gesamten Kulturen wurden dann geerntet und umgepflanzt, um die Anzahl der "sekundären" CFU-macro GEMM zu bewerten, die während der primären Kulturperiode zwar produziert, aber nicht nachgewiesen wurden. In solchen Experimenten ergaben adhärente Markzellen signifikant höhere Zahlen von sekundären CFU-macro GEMM als frische oder nicht adhärente Markzellen. Die Entfernung makroskopischer Kolonien vor dem Umpflanzen zeigte, dass die meisten sekundären CFU-macro GEMM nicht von primären CFU-macro GEMM abgeleitet waren. In-vivo-Studien zeigten ebenfalls einen differentiellen Effekt der Adhäsionstrennung auf die Häufigkeit von Tag-10-CFU-S, die abnahm, im Vergleich zu Zellen, die in der Lage waren, eine langfristige Repopulation durchzuführen, die zunahm. Primäre adhärente CFU-macro GEMM von mit 5-Fluoruracil (5-FU) behandelten Mäusen wiesen eine 18-fach höhere Selbstverjüngungskapazität auf als ihre Gegenstücke im normalen Mark. Dennoch waren die meisten sekundären CFU-macro GEMM, die aus primären Kulturen adhärenter 5-FU-Zellen gewonnen wurden, erneut nicht von primären CFU-macro GEMM abgeleitet. Zellen, die in der Lage sind, sofort große multilineare Kolonien zu erzeugen, scheinen somit ein intermediäres Kompartiment pluripotenter Vorläufer darzustellen, deren Eigenschaften zur Selbstverjüngung jedoch über einen erheblichen Bereich variieren können. Unsere Ergebnisse deuten ferner darauf hin, dass diese Vorläufer letztendlich von einer primitiveren adhärenten Zelle abgeleitet sind, deren Tendenz, in vitro zu beginnen sich zu teilen, gering ist und deren Anwesenheit mit Zellen korreliert, die in vivo zu langfristiger myeloider Repopulation fähig sind.