Die Aktivierung der Mitogen-aktivierten Proteinkinase/extrazellulär regulierten Proteinkinase durch Onkogene, Serum und 12-O-Tetradecanoylphorbol-13-acetat erfordert Raf und ist notwendig für die Transformation.

Die Proteinkinase-Kaskade Raf-MAPKK/MEK-MAPK/ERK verbindet Proteintyrosinkinase-Rezeptoren in der Membran mit der Kontrolle der Aktivität von Transkriptionsfaktoren im Zellkern. Wir haben untersucht, ob Raf für die Aktivierung dieser Kaskade notwendig ist und ob dieser Signalweg für die Transformation relevant ist. Durch die Verwendung von transienten Assays mit epitope-getaggtem ERK-1 cDNA und einem dominant inhibierenden Mutanten von Raf-1 fanden wir heraus, dass Serum und 12-O-Tetradecanoylphorbol-13-acetat sowie Vertreter von drei Klassen von Onkogenen (Proteintyrosinkinasen abl/src, Ras und Proteinkinase Serin/Threonin mos/cot) alle Raf-abhängig für die Stimulation von MAPK waren. Alle MAPK-stimulierenden Onkogene waren auch Aktivatoren der Raf-Kinase, wie durch die Verschiebungsinduktion beurteilt. Es scheint also, dass es wenig oder keine Redundanz in den von Wachstumsregulatoren verwendeten Wegen zur Aktivierung von MAPK/ERK gibt. Darüber hinaus scheint die Fähigkeit, MAPK/ERK zu stimulieren, entscheidend für die Transformation durch onkogenes Raf-1 zu sein, und ERK-1 und -2 synergierten mit v-raf in einem Fokussierungsinduktionsassay an NIH3T3-Zellen, während kinase-tote Mutanten von ERK-2 hemmend wirkten. Das Raf/ERK-Synergismus wurde auch bei der transkriptionalen Transaktivierung des Onkogen-Reaktionselements im Polyoma-Enhancer beobachtet. Wir schließen daraus, dass dieser Raf-Signalweg, der an viele upstream-Aktivatoren und downstream-Effektoren anschließt, für die Transformation durch die meisten Onkogene essentiell ist.