Multicolor- und Elektronenmikroskopische Bildgebung des Connexin-Transportes

Rekombinante Proteine, die Tetracystein-Tags enthalten, können in lebenden Zellen nacheinander mit verschiedenen Farben biarsenikalischer Fluorophore markiert werden, sodass ältere und jüngere Proteinmoleküle sowohl durch Fluoreszenz als auch durch Elektronenmikroskopie scharf unterschieden werden können. Hier verwendeten wir diesen Ansatz, um zu zeigen, dass neu synthetisiertes Connexin43 vorzugsweise in 100 bis 150 Nanometer großen Vesikeln zur Plasmamembran transportiert und am Rand bestehender Gap-Junctions integriert wurde, während ältere Connexine vom Zentrum der Plaques in pleiomorphe Vesikel mit weit variierenden Größen entfernt wurden. Die selektive Bildgebung durch korrelierte optische und Elektronenmikroskopie von Proteinmolekülen bekannten Alters wird grundlegende Prozesse des Proteintransports in situ klären.