Die kanonische CS-B war nicht essenziell für die Bildung subgenomischer mRNAs, aber ihre Anwesenheit erhöhte die Transkriptionsniveaus um mindestens das 10^3-Fache im Vergleich zu ihrer Abwesenheit.
Andere
Die Transkription von Coronaviren führt zur Synthese eines verschachtelten Sets von mRNAs mit einer Führungssequenz, die vom 5'-Ende des Genoms abgeleitet ist. Die mRNAs werden durch eine diskontinuierliche Transkription erzeugt, bei der die Führungssequenz mit den mRNA-kodierenden Sequenzen verknüpft ist. Dieser Prozess wird durch transkriptionsregulierende Sequenzen (TRSs) reguliert, die jeder mRNA vorausgehen, einschließlich einer hochkonservierten Kerns Sequenz (CS) mit hoher Identität zu Sequenzen im Virusgenom und am 3'-Ende der Führungssequenz (TRS-L). Die Rolle der TRSs wurde durch reverse Genetik unter Verwendung eines vollständigen infektiösen Coronavirus-cDNA und der zielgerichteten Mutagenese der CS analysiert. Die kanonische CS-B war nicht essenziell für die Bildung von subgenomischen mRNAs (sgmRNAs), aber ihre Anwesenheit führte zu Transkriptionsniveaus, die mindestens 10^3-fach höher waren als in ihrer Abwesenheit. Die erhaltenen Daten sind mit einem Transkriptionsmechanismus kompatibel, der drei Schritte umfasst: (i) Bildung von 5'-3'-Komplexen in der genomischen RNA, (ii) Basenpaarungs-Scanning des naszenten negativen RNA-Strangs durch die TRS-L, und (iii) Template-Switching während der Synthese des negativen Strangs, um die negative sgRNA zu vervollständigen. Dieser Template-Switch erfolgt nach dem Kopieren der CS-Sequenz und wurde in silico basierend auf einem hohen Basenpaarungs-Score zwischen dem naszenten negativen RNA-Strang und der TRS-L sowie minimalem DeltaG vorhergesagt.
Zúñiga et al. (Dienstag,) führten eine weitere Untersuchung zum Coronavirus durch. Die gezielte Mutagenese der Kernsequenz (CS) vs. das Fehlen der kanonischen CS-B wurde hinsichtlich der Generation von subgenomischen mRNAs (sgmRNAs) und Transkriptionsniveaus bewertet. Die kanonische CS-B war nicht essentiell für die Erzeugung subgenomischer mRNAs, aber ihre Anwesenheit erhöhte die Transkriptionsniveaus um mindestens das 10^3-Fache im Vergleich zu ihrem Fehlen.