Antigenretrieval-Immunhistochemie unter dem Einfluss von pH unter Verwendung monoklonaler Antikörper.

Der Antigenretrieval (AR), der eine Hochtemperatur-Mikrowellenbehandlung (MW) von Gewebeschnitten vor der Immunfärbung umfasst, ist eine revolutionäre Technik, die es ermöglicht, die Antigene in formalinfixierten Gewebeschnitten freizulegen, sodass sie für die immunhistochemische Färbung verfügbar werden. Obwohl man glaubt, dass hohe Temperaturen der primäre Mechanismus bei der Retrieval von Antigenen sind, wurden verschiedene chemische Lösungen getestet, um eine optimale AR-Lösung zu definieren. Wir prüften die Hypothese, dass der pH-Wert der AR-Lösung die Qualität der Immunfärbung beeinflussen kann, indem wir sieben verschiedene AR-Pufferlösungen bei einer Reihe von unterschiedlichen pH-Werten von 1 bis 10 verwendeten. Wir bewerteten die Färbung von monoklonalen Antikörpern gegen zytoplasmatische Antigene (AE1, HMB45, NSE), nukleare Antigene (MIB-1, PCNA, ER) und Zelloberflächenantigene (MT1, L26, EMA) auf routinemäßig formalinfixierten, paraffineingebetteten Schnitten unter verschiedenen pH-Bedingungen mit MW-Heizung für 10 Minuten. Die Intensität der Immunfärbung wurde blind bewertet. Der pH-Wert der AR-Pufferlösung wurde vor, unmittelbar nach und 15 Minuten nach dem AR-Verfahren sorgfältig gemessen. Der Einfluss des pH auf die AR-immunhistochemische Färbung kann in drei Muster zusammengefasst werden. Einige Antigene (L26, PCNA, AE1, EMA und NSE) zeigten eine ausgezeichnete Retrieval über den gesamten pH-Bereich. Andere Antigene (MIB1 und ER) wiesen eine starke Intensität der immunhistochemischen Färbung bei sehr niedrigem pH und bei neutralem bis hohem pH auf, jedoch einen dramatischen Rückgang der Intensität der AR-Immunfärbung bei mäßig saurem pH (pH 3-6). Wieder andere (MT1 und HMB45) zeigten eine zunehmende Intensität der AR-Immunfärbung mit steigendem pH, jedoch nur eine schwache Immunfärbung bei niedrigem pH. Unter den sieben Pufferlösungen war die Intensität der AR-Immunfärbung bei jedem gegebenen pH-Wert sehr ähnlich. Allerdings neigte der Tris-HCl-Puffer dazu, bei höherem pH bessere Ergebnisse im Vergleich zu anderen Puffern zu erzielen. Obwohl man glaubt, dass die Hochtemperaturbehandlung der wichtigste Faktor für die AR-Technik ist, ist der pH-Wert der AR-Lösung ein wichtiger Mitfaktor für einige Antigene. Die Optimierung des AR-Systems sollte daher die Optimierung des pH der AR-Lösung umfassen. Unsere Ergebnisse deuten darauf hin, dass die AR-Immunfärbung von Tris-HCl- oder Natriumacetatpuffer bei pH 8–9 für die meisten Antigene geeignet sein kann, obwohl bestimmte nukleare Antigene eine optimale Färbung bei niedrigem pH zeigen.