Immunochemische Lokalisation und Aminosäuresequenzen von kreuzreaktiven Epitopen innerhalb des Gruppe A Streptokokken M6-Proteins.

Die monoklonalen Antikörper 10A11, 10B6 und 10F5, die gegen das native Gruppe A Streptokokken M6-Protein gerichtet sind, wurden auf ihre Kreuzreaktivität mit nicht im Labor passierten klinischen Isolaten untersucht, die 58 M-Serotypen repräsentieren, mittels Bakterien-Dot-Blot-Immunoassay. mAb 10A11 reagierte kreuzreaktiv mit 9, mAb 10B6 mit 30 und mAb 10F5 mit 30 verschiedenen nicht-M6-Serotypen. Um die Epitopstellen für diese Antikörper zu identifizieren, wurde das native M6-Protein mit Pepsin oder Staphylokokken V8-Protease gespalten. Die resultierenden Peptide wurden mittels HPLC gereinigt, auf Bindung an kreuzreaktive mAbs im ELISA untersucht, und reaktive Peptide wurden einer Aminosäuresequenzanalyse unterzogen. Die Peptide wurden mit der Aminosäuresequenz des gesamten M6-Proteins abgeglichen, die durch die DNA-Sequenz des M6-Gens vorhergesagt wurde. Wettbewerbshemmungsstudien unter Verwendung von Peptiden, die auf Basis von Peptid- und DNA-Sequenzen synthetisiert wurden, zusammen mit selektivem Blockieren von Aminosäureresten, ermöglichten die weitere Identifikation und Platzierung dieser kreuzreaktiven Epitopen innerhalb des M6-Moleküls. Das 10A11-Epitop wurde innerhalb der sechs Aminosäurereste an der Position 134-139 lokalisiert, die an den Positionen 159-164 und 184-189 innerhalb der variablen aminoterminalen Hälfte des nativen Moleküls wiederholt werden. Die konservierten 10B6- und 10F5-Epitopen wurden innerhalb eines 15-Aminosäure-Spans an der Position 275-289 positioniert, mit der Möglichkeit, dass entweder Epitop an den Resten 239-247 wiederholt worden sein könnte. Die chemische Modifikation von Aminosäuren innerhalb dieser Sequenz unterstützte die Differenzierung dieser beiden Epitopen. Solche Studien sollten bei der Erkennung einer Sequenz(en) helfen, die für eine größere Anzahl von M-Serotypen gemeinsam ist, was nützlich für zukünftige Impfstoffentwicklungen oder die Identifizierung von Gruppe A Streptokokken sein könnte.