Das menschliche Zytomegalovirus UL74-Gen kodiert die dritte Komponente des Glycoprotein H-Glycoprotein L-haltigen Hüllkomplexes

Der gCIII-Hüllkomplex des menschlichen Zytomegalovirus (HCMV) besteht aus Glycoprotein H (gH; gpUL75), Glycoprotein L (gL; gpUL115) und einem dritten, 125-kDa Protein, das nicht mit gH oder gL verwandt ist (M. T. Huber und T. Compton, J. Virol. 71:5391-5398, 1997; L. Li, J. A. Nelson und W. J. Britt, J. Virol. 71:3090-3097, 1997). Analysen der Glycosidasedigestion haben gezeigt, dass das 125-kDa Protein ein Glycoprotein ist, das ca. 60 kDa N-verknüpfte Oligosaccharide auf einem Peptidgerüst von 65 kDa oder weniger enthält. Basierend auf diesen biochemischen Eigenschaften wurden zwei offene Leserahmen des HCMV, UL74 und TRL/IRL12, als Kandidatengene für das 125-kDa Glycoprotein identifiziert. Um das Gen zu identifizieren, das das 125-kDa Glycoprotein kodiert, reinigten wir den gCIII-Komplex, trennten die Komponenten durch Natriumdodecylsulfat-Polyacrylamid-Gelelektrophorese und unterzogen gH und das 125-kDa Glycoprotein einer Aminosäure-Mikrosequenzanalyse. Die Mikrosequenzierung eines internen Peptids, das aus dem gereinigten 125-kDa Glycoprotein abgeleitet wurde, ergab die Aminosäuresequenz LYVGPTK. Eine FASTA-Suche ergab eine exakte Übereinstimmung dieser Sequenz mit den Aminosäuren 188 bis 195 des vorhergesagten Produkts des Kandidatengens UL74, das wir Glycoprotein O (gO) bezeichnet haben. Anti-gO-Antikörper reagierten in Immunblot-Analysen mit einer Proteinart, die bei ca. 100 bis 125 kDa in Lysaten von HCMV-infizierten Zellen wanderte, sowie mit 100- und 125-kDa Proteinarten in gereinigten Virionen. Anti-gO-Antikörper immunopräzipitierten auch den gCIII-Komplex und erkannten die 125-kDa Glycoprotein-Komponente des gCIII-Komplexes. Positionale Homologe des UL74-Gens wurden in anderen Betaherpesviren gefunden, und Vergleiche der vorhergesagten Produkte der UL74-Homolog-Gene zeigten eine Reihe von konservierten biochemischen Merkmalen.