Isolation von Einzelkopien menschlicher Gene aus einer Bibliothek von Klonen künstlicher Hefechromosomen

Ein kürzlich entwickeltes Kloningsystem, das auf der Verbreitung großer DNA-Moleküle als lineare, künstliche Chromosomen in der Hefe Saccharomyces cerevisiae basiert, bietet eine potenzielle Methode zur Klonierung des gesamten menschlichen Genoms in Segmenten von mehreren Hundert Kilobasenpaaren. Die meisten Anwendungen dieses Systems erfordern die Fähigkeit, spezifische Sequenzen aus Bibliotheken von Klonen künstlicher Hefechromosomen zu extrahieren und diese Sequenzen in Hefe ohne Veränderungen zu propagieren. Zwei Einzelkopien-Gene wurden nun aus einer Bibliothek von Klonen künstlicher Hefechromosomen kloniert, die aus totaler menschlicher DNA vorbereitet wurde. Mehrere unabhängige Isolate der Gene, die für Faktor IX und Plasminogen-Aktivator-Inhibitor Typ 2 kodieren, wurden erhalten. Die Klone, deren Größe von 60 bis 650 Kilobasen variierte, erwiesen sich als stabil bei längerer Verbreitung in Hefe und scheinen treue Replikate der menschlichen DNA zu enthalten.