Kartierung der Interaktionsdomänen von p53 und mdm-2.

Das 90-kDa zelluläre Protein, das vom Maus-mdm-2-Onkogen codiert wird, bindet in vivo an das p53-Protein und hemmt dessen Transaktivierungsfunktion (J. Momand, G. P. Zambetti, D. C. Olson, D. George und A. J. Levine, Cell 69:1237-1245, 1992). cDNA-Klone, die das menschliche Homolog des mdm-2-Proteins (auch hdm-2 genannt) kodieren, wurden aus einer HeLa-Zell-cDNA-Bibliothek isoliert. Eine Reihe von monoklonalen Antikörpern wurde gegen das menschliche mdm-2-Protein erzeugt, und die von diesen Antikörpern erkannten Epitopen wurden kartiert. Durch den Bau einer Reihe von Deletionsmutanten wurde der Bereich des mdm-2-Proteins, der für die Komplexbildung mit dem p53-Protein entscheidend ist, auf den N-terminalen Teil des menschlichen mdm-2-Proteins kartiert. Interessanterweise gelang es einem monoklonalen Antikörper mit einem Epitop, das sich in demselben Bereich befindet, nicht, den mdm-2-p53-Komplex zu immunpräzipitieren, und es schien nur das freie mdm-2-Protein zu erkennen. Die Domäne des p53-Proteins, die für die Interaktion mit dem menschlichen mdm-2-Protein ausreichend ist, wurde auf die N-terminalen 52 Aminosäurereste des p53-Proteins kartiert. Dieser Bereich enthält die Transaktivierungsdomäne von p53, was darauf hindeutet, dass mdm-2 die p53-Funktion möglicherweise hemmt, indem es dessen Interaktion mit der allgemeinen Transkriptionsmaschinerie stört.