Hemmung der Calcium-Pumpe in roten Blutkörperchen durch Eosin und andere Fluorescein-Analoga

In dieser Arbeit wird der Mechanismus der Hemmung der Plasma-Membran-Ca-Pumpe durch Fluorescein-Analoga und deren Isothiocyanat-Derivate behandelt. Eosin (d.h. Tetrabromfluorescein) wurde als eines der potentesten reversiblen Inhibitoren der Ca-Pumpe in Erythrozyten identifiziert, mit einer halbmaximalen hemmenden Konzentration (IC50) < 0,2 Mikromolar; Fluorescein selbst war etwa vier Größenordnungen weniger potent (IC50 etwa 1.000 Mikromolar). Eosin verringerte den maximalen Einstrom und konkurrierte somit nicht mit ATP um die Ca-Pumpe. Auch die irreversible Hemmung, die durch die Isothiocyanat-Analoga von Eosin und Fluorescein, Eosin-5-Isothiocyanat (EITC) und Fluorescein-5-Isothiocyanat (FITC) verursacht wurde, wurde untersucht. Während EITC reversibel an die Eosin-Stelle bindet, deuten zwei Ergebnisse darauf hin, dass EITC an dieser Stelle nicht kovalent reagiert: 1) Eosin veränderte nicht den zeitlichen Verlauf der irreversiblen Reaktion von EITC, und 2) die Konzentrationsabhängigkeit der reversiblen EITC-Hemmung unterschied sich von der Konzentrationsabhängigkeit der irreversiblen EITC-Hemmung. ATP verlangsamte die Inaktivierungsrate sowohl von EITC als auch von FITC, was der Vorstellung entspricht, dass EITC und FITC an die ATP-Stelle binden. Unsere Ergebnisse sind konsistent mit der Annahme, dass Eosin und ATP an separaten Stellen binden und EITC kovalent an der ATP-Stelle reagiert, nicht jedoch an der Eosin-Stelle.