Die kooperative Interaktion zwischen dem Interferon (IFN) Stimulus-Antwort-Element und Kappa B Sequenzmotiven steuert die IFN Gamma- und lipopolysaccharid-stimulierte Transkription vom murinen IP-10 Promoter.

Die transkriptionale Regulation des murinen IP-10 Gens in lipopolysaccharid (LPS) oder mit Interferon Gamma (IFN Gamma) behandelten Makrophagen wurde durch die Analyse der Regionen des Gens untersucht, die die Transkriptionsstartstelle flankieren. Eine Serie von Sequenzfragmenten wurde 5' des Chloramphenicol-Acetyltransferase (CAT) Reporter-Gens platziert und die Fähigkeit zur Vermittlung der Transkription von CAT als Antwort auf die Behandlung mit IFN Gamma oder LPS wurde nach transienten Transfektionen in der makrophagenähnlichen Zelllinie RAW 264.7 untersucht. Die Analyse größerer Konstrukte identifizierte eine potenzielle negative regulatorische Stelle für die IFN Gamma Antwort im Bereich zwischen den Nukleotidpositionen -2002 und -930 und einen positiven Regulator für die LPS Antwort im Bereich zwischen den Basen -930 und -676. Ein 227-Basen-Fragment, das die Positionen -228 bis -2 überspannt, war die minimale Sequenz, die in der Lage war, die LPS- und IFN Gamma-abhängige Transkription von CAT zu vermitteln. Die Deletion von 24 Basen, die ein hochkonserviertes IFN Stimulus-Antwort-Element (ISRE) aus dem -228 Konstrukt beinhaltete, hob die Antwort auf IFN Gamma auf. Ein 33-Basen-Fragment, das das IP-10 ISRE enthielt, war in der Lage, sowohl IFN Gamma- als auch LPS-Empfindlichkeit auf einen heterologen Promoter zu übertragen. Die Fähigkeit von LPS, CAT über das ISRE zu stimulieren, wurde anscheinend durch die intermediate Expression von endogenem IFN Alpha/Beta vermittelt. Die Eliminierung der Basen -204 bis -102 hob die Empfindlichkeit gegenüber LPS auf. Diese Region enthält zwei Kappa B-Bindungsstellen. Die gezielte Mutagenese von Schlüssel- Nukleotiden im ISRE und den zwei Kappa B-Stellen zeigte, dass die optimale Antwort auf IFN Gamma sowohl das ISRE als auch eine der zwei Kappa B-Stellen erforderte, während die optimale Antwort auf LPS entweder beide Kappa B-Stellen oder eine Kappa B-Stelle und das ISRE erforderte. Die Behandlung mit IFN Gamma oder LPS induzierte sequenzspezifische Bindungsaktivität für das ISRE und die zwei Kappa B-Stellen. Diese Ergebnisse deuten darauf hin, dass die 230 Nukleotide stromaufwärts von der Transkriptionsstartstelle wichtig für die transkriptionale Kontrolle des IP-10 Gens als Antwort auf IFN Gamma und LPS sind. Die drei definierten regulatorischen Elemente funktionieren für jeden der beiden Stimuli auf unterschiedliche Weise; die optimale Reaktion auf entweder IFN Gamma oder LPS erfordert eine Kooperation zwischen mindestens zwei Stellen.