Ruhe- und Enddiastolische Ca2+i-Messungen im Langendorff-perfundierten Frettchenherz beladen mit einem 19F NMR-Indikator

Die intrazelluläre freie Kalziumkonzentration (Ca2+i) wurde in Langendorff-perfundierten Frettchenherzen (30 Grad C, pH 7,4) gemessen, indem die gepulsten Herzen mit dem 19F NMR-Kalziumindikator, dem 5,5'-Difluor-Derivat von 1,2-Bis(o-Aminophenoxy)ethan-N,N,N',N'-Tetraessigsäure (5FBAPTA), auf eine Anfangskonzentration von etwa 120 μM in der Zytosol geladen wurden. Eine Erhöhung der Pulsfrequenz erhöhte das Enddiastolische Ca2+i von 299 +/- 44 nM (Mittelwert +/- SEM) bei 0,2 Hz auf 522 +/- 54 nM bei 1,0 Hz und 691 +/- 166 nM bei 2,0 Hz. Die Erhöhung von Cao von 1,8 auf 7,0 mM bei einer Pulsfrequenz von 1,0 Hz erhöhte das Enddiastolische Ca2+i auf 625 +/- 39 nM. In nicht gepulsten Herzen, die mit Diltiazem (100 μM) perfundiert wurden, fiel Ca2+i nach 60 Minuten schnell auf einen Stabilwert von < 100 nM. Die Erhöhung von Cao von 1,8 auf 7,0 mM hatte keinen nachweisbaren Effekt auf das Ruhe-Ca2+i. Der zeitliche Verlauf des Ca2+i-Transienten wurde in Herzen gemessen, die mit 1,1 Hz gepulst und mit 1,8 mM Cao perfundiert wurden. Der Spitzenwert von Ca2+i betrug etwa 2 μM etwa 150 msec nach dem Puls und der maximale entwickelte LVP trat bei 550 msec auf im Vergleich zu 280 msec in Kontrollherzen, die nicht mit 5FBAPTA beladen waren. Vergleiche mit Daten, die mit anderen Techniken, einschließlich fluoreszenzbasierter Ca2+i-Indikatoren, gewonnen wurden, implizieren, dass obwohl die Enddiastolischen Ca2+i-Werte, die mit 5FBAPTA in schlagenden Herzen erhalten wurden, durch die Konzentrationen von intrazellulärem 5FBAPTA, die für die Signalentdeckung erforderlich sind, erhöht sind, die beobachteten Veränderungen in Ca2+i als Antwort auf experimentelle Interventionen qualitativ konsistent mit früheren Daten sind.