Eine neuartige, kohlenhydratvermittelte Phosphorylierung von Zelloberflächenproteinen: Gangliosid GQ1b stimuliert die Ecto-Protein-Kinase-Aktivität auf der Zelloberfläche einer menschlichen Neuroblastomzelllinie, GOTO2

Ein gangliosid-stimulierter Ecto-Typ Phosphorylierungssystem (ecto-Gg-Kinase) wurde auf der Zelloberfläche einer menschlichen Neuroblastomzelllinie (GOTO) nachgewiesen. Bei Inkubation intakter Zellen mit gamma-32PATP wurden mindestens 28 Zelloberflächenproteine phosphoryliert, wie aus der SDS-PAGE (4-20%) Analyse ersichtlich. Exogen hinzugefügte Ganglioside stimulierten spezifisch die Phosphorylierung von mindestens drei zelloberflächenassoziierten Proteinen mit einem Molekulargewicht von 64.000, 60.000 und 54.000. Die Phosphorylierung war auf Thr- und Ser-Reste gerichtet, wie durch saure Hydrolyse gefolgt von Elektrophorese offenbart. GQ1b, bei 5 nM, war das stärkste unter den getesteten Gangliosiden und war effektiver, wenn es vor der Gabe von gamma-32PATP zu den Zellen hinzugefügt wurde. Die gleichzeitige Zugabe einer übermäßigen Menge der Saccharidkomponente von GQ1b (oligo-GQ1b) hemmte die durch GQ1b stimulierte Phosphorylierung, was die Notwendigkeit der Sialosaccharidgruppe anzeigt. Diese Ergebnisse deuten stark darauf hin, dass die Phosphorylierung der drei Proteine eng mit dem hochspezifischen neuritogenen Effekt von GQ1b verbunden sein könnte, der zuvor berichtet wurde.