Klone-freies CRISPR/Cas-System erleichtert funktionelle Kassette-Knock-in in Mäusen

Obwohl das CRISPR/Cas-System die Einstufen-Generation von Knockout-Mäusen ermöglicht hat, begrenzen niedrige Erfolgsquoten bei Kassette-Knock-ins dessen Anwendungsbereich. Hier zeigen wir, dass die klone-freie, direkte nukleare Lieferung des Cas9-Proteinkomplexes mit chemisch synthetisierten dualen RNAs eine hoch effiziente Zielverdauung ermöglicht, was zur Erzeugung von Knock-in-Mäusen führt, die eine funktionelle Kassette mit einer Effizienz von bis zu 50 % tragen, verglichen mit nur 10 % durch eine häufig verwendete Methode, die aus Cas9-mRNA und single guide RNA besteht. Unser klone-freies CRISPR/Cas-System erleichtert die schnelle Einstufen-Generation von Kassette-Knock-in-Mäusen und beschleunigt die funktionelle genomische Forschung, indem es verschiedene in vivo genetische Werkzeuge bereitstellt.