Analyse von excisierten oxidativen DNA-Läsionen: Isolation von 8-Oxoguanin und dessen Nukleosidderivaten aus biologischen Flüssigkeiten mit einer monoklonalen Antikörper-Säule.

Es wird eine Immunaffinitätsäule beschrieben, die die Analyse oxidativer Schadprodukte von DNA und RNA in Urin, Blutplasma und Medium aus Kulturen von Escherichia coli erleichtert. Bei intakten Tieren werden Läsionen (Addukte), die aus DNA excisiert wurden, von der Zelle durch die Blutzirkulation transportiert und im Urin ausgeschieden. Bei Bakterien werden DNA-Addukte direkt in das Medium ausgeschieden. In beiden Fällen können die Addukte als Maß für oxidative Schäden an DNA analysiert werden. Ein monoklonaler Antikörper, der 8-oxo-7,8-dihydro-2'-deoxyguanosin (oxo8dG; 8-hydroxy-2'-deoxyguanosin), einem Biomarker für oxidative Schäden an DNA, erkennt, wurde isoliert und seine Substratbindungs-Eigenschaften wurden charakterisiert. Die relativen Bindungsaffinitäten dieses monoklonalen Antikörpers für oxo8dG, unmodifizierte Nukleoside oder Derivate von Guanin machten ihn geeignet für die Herstellung von Immunaffinitätsäulen, die die Isolation von oxo8dG, 8-Oxo-7,8-dihydroguanine und 8-Oxo-7,8-dihydroguanosin aus verschiedenen biologischen Flüssigkeiten erheblich erleichtern. Die quantitative Analyse dieser Addukte im Urin von Ratten, die eine nucleinsäurefreie Diät erhalten haben, und im Medium aus Kulturen von E. coli legt nahe, dass oxo8-7,8-dihydroguanin das Haupt-Reparaturprodukt von oxo8-dG in der DNA sowohl eukaryotischer als auch prokaryotischer Zellen ist. Die Ergebnisse unterstützen unsere vorherige Schätzung von etwa 10(5) oxidativen Läsionen in der DNA, die in einer durchschnittlichen Rattenzelle pro Tag gebildet und excisiert werden.