Klonierung, Nukleotidsequenz und Expression eines von zwei Genen, die für den Elongationsfaktor 1 alpha der Hefe kodieren.

Ein Gen, das für den zytoplasmatischen Elongationsfaktor 1 alpha (EF-1 alpha) der Hefe kodiert, wurde durch Koloniehybridisierung unter Verwendung einer aus gereinigter EF-1 alpha-mRNA hergestellten cDNA-Sonde isoliert. Bei einem rekombinanten Plasmid, pLB1, mit einem 6-Kilobasen-Hefe-DNA-Insert wurde durch Hybridselektions- und Translationsexperimente festgestellt, dass es das gesamte Gen trägt. Die Nukleotidsequenz des Gens mit seinen 5'- und 3'-flankierenden Regionen wurde bestimmt. Die 5'- und 3'-Enden der EF-1 alpha-mRNA wurden mittels der S1-Nuklease-Mapping-Technik lokalisiert. Das klonierte Gen, genannt TEF1, kodiert für ein Protein aus 458 Aminosäuren (Mr = 50,071) in einem einzigen, ununterbrochenen Leserahmen. Die Aminosäuresequenz zeigt eine starke Homologie mit mehreren Domänen des zytoplasmatischen Faktors EF-1 alpha von Artemia salina, wie durch diagonale Dot-Matrix-Analyse nachgewiesen wurde. Die Proteinsequenzhomologie ist im Vergleich zum mitochondrialen Elongationsfaktor der Hefe deutlich geringer. S1-Nuklease-Mapping der mRNA, Hybridisierungsanalysen chromosomaler DNA unter Verwendung intragener oder extragener DNA-Sonden und Gen-Disruption-Experimente zeigten die Existenz von zwei Genen, die für den zytoplasmatischen Elongationsfaktor EF-1 alpha/haploides Genom kodieren. Das Vorhandensein eines intakten chromosomalen TEF1-Gens ist für das Wachstum haploider Hefezellen nicht essenziell.