RNKP-1, ein neuartiges, mit natürlichen Killerzellen assoziiertes Serinprotease-Gen, das aus RNK-16 zytotoxischen Lymphozyten kloniert wurde.

Aus einer RNK-16 lambda-gt11 Bibliothek haben wir eine neuartige cDNA-Ratten-NK-Zell-Protease 1 (RNKP-1) isoliert und sequenziert, die charakteristische Merkmale von Serinproteasen aufweist. Der cDNA-Klon ist 1102 bp lang und enthält einen vollständigen offenen Leserahmen mit einem AUG-Startcodon und einem TAA-Stoppcodon. Der offene Leserahmen übersetzt sich in ein Protein mit 248 Aminosäuren, das eine Glykosylierungsstelle aufweist. Die charakteristischen N-terminalen Ile-Ile-Gly-Gly und die Aminosäure-Reste His, Asp und Ser, die das katalytische Triaden von Serinproteasen bilden, sind vorhanden. Die Nukleotid- und Aminosäuresequenzen weisen 87 bzw. 80 % Identität mit der murinen CTL-spezifischen Serinprotease CCPI auf. Es gibt jedoch umfassende Unterschiede in den Substratbindingsbereichen dieser Proteasen. Der Vergleich von hydropathischen Profiles und Aminosäuresequenzen anderer Proteasen zeigt, dass RNKP-1 einzigartig ist und zur Unterfamilie der Serinproteasen aus Knochenmark gehört. Eine Northern-Blot-Analyse von poly A+ RNA aus Ratten-Splenozyten, die mit Con A kultiviert wurden, zeigte, dass nach 1 Tag Con A-Stimulation 1000 und 1400 Nukleotid-mRNA mit RNKP-1 nachgewiesen werden. Die Expression der beiden mRNA-Banden setzt sich bis zum 5. Tag der Kultur mit dem Lektin fort und könnte RNKP-1-mRNA plus verwandte Sequenzen aufgrund von Kreuzhybridisierung darstellen. RNKP-1 wird auch in RNK-16-Zellen exprimiert, jedoch nicht in frisch isolierten Ratten-Splenozyten, -gehirn, -lungen oder -lymphknotengeweben. Die Induktion der RNKP-1-Expression in den mit Con A kultivierten Milzzellen ist begleitet von einem Anstieg sowohl der NK- als auch der lymphokin-aktivierten Killerlymphozytenaktivitäten. Diese Daten deuten darauf hin, dass RNKP-1 eine einzigartige Serinprotease ist, die möglicherweise bevorzugt in NK-Zellen exprimiert wird.