Hausgemachte standortspezifische Mutagenese ganzer Plasmide

Die standortspezifische Mutagenese ganzer Plasmide ist eine einfache Möglichkeit, leicht unterschiedliche Varianten eines ursprünglichen Plasmids zu erstellen. Mit dieser Methode kann das klonierte Zielgen durch Substitution, Löschung oder Einfügung von wenigen Basen direkt in ein Plasmid verändert werden. Es funktioniert, indem das gesamte Plasmid in einer nicht PCR-basierten Thermocycling-Reaktion einfach amplifiziert wird. Während der Reaktion werden mutagene Primer, die die gewünschte Mutation tragen, in das neu synthetisierte Plasmid integriert. In diesem Video-Tutorial zeigen wir eine einfache und kostengünstige Möglichkeit, Basensubstitutionen in ein Plasmid einzuführen. Das Protokoll funktioniert mit Standardreagenzien und ist unabhängig von kommerziellen Kits, die oft sehr teuer sind. Die Anwendung dieses Protokolls kann die Gesamtkosten einer Reaktion auf ein Achtel der Kosten reduzieren, die mit einigen der kommerziellen Kits verbunden sind. In diesem Video kommentieren wir auch kritische Schritte während des Prozesses und geben detaillierte Anweisungen zur Gestaltung der mutagenen Primer.