Eine neuartige dual-spezifische Phosphatase, die durch Serumstimulation und Hitzeschock induziert wird.

Um neue Mitglieder einer Familie von Protein-Tyrosin-Phosphatasen (PTPs), von denen VH1 das Prototyp ist, zu identifizieren, haben wir eine cDNA-Bibliothek aus menschlichen mammären Epithelzellen (B5/589) durch Hybridisierung mit geringer Stringenz mit Sonden für die katalytischen Domänen der menschlichen VHR und Maus 3CH134 Phosphatasen gescreent. Zwei sich überschneidende Klone mit 1,8 und 2,5 Kilobasenpaaren wurden durch 3CH134, jedoch nicht durch VHR-Sonden entdeckt. Die Sequenzanalyse des größten Klons, B23, ergab einen 2470-Nukleotid langen offenen Leserahmen, der ein neuartiges Protein kodiert. Innerhalb der 397 Aminosäure langen Sequenz wurde die HCXAGXXR-Signatursequenz für PTPs an den Positionen 261-268 lokalisiert. Die engsten Ähnlichkeiten bestanden zu 3CH134, seinem menschlichen homologen CL100 und PAC-1, PTPs, die als Frühantwortgene auf Mitogenstimulation induziert werden. Weniger Verwandtschaft wurde mit den dual-spezifischen Phosphatasen VHR und VH1 des Menschen und des Vaccinia-Virus beobachtet. Ein bakteriell exprimiertes rekombinantes Protein, das die katalytische Domäne von B23 enthielt, zeigte signifikante, aber konstant niedrigere Aktivität als VHR in vitro. Unter den getesteten Substraten wies B23 die höchste relative Aktivität gegenüber phosphoryliertem extrazellulärem Signal-reguliertem Kinase-1 auf, was darauf hindeutet, dass es möglicherweise ein Ziel für die Aktivität von B23 in vivo ist. Der B23-Transkript wurde in einer Vielzahl von normalen menschlichen Geweben nachgewiesen, mit relativ hoher Expression in der Bauchspeicheldrüse und im Gehirn. B23 wurde durch Serumstimulation menschlicher Fibroblasten sowie durch Hitzeschock mit ähnlicher Kinetik induziert wie die, die bei CL100 beobachtet wurde. Somit ist B23 eine neue menschliche Proteinphosphatase, die scheinbar als Reaktion auf mitogene Signalisierung und mindestens einige Formen von Stress reguliert wird.