Das Pre-mRNA-Spleißen der IgM Exons M1 und M2 wird durch einen benachbarten Spleißenhancer und -inhibitor geleitet

Das Spleißen bestimmter Pre-mRNA-Introns hängt von einem Enhancerelement ab, das typischerweise purinreich ist. Es wird allgemein thought, dass Enhancer die Nutzung suboptimaler Spleißsignale erhöhen, und ein spezifischer Vorschlag ist, dass Enhancer die Bindung von U2AF65 an schwache polypyrimidine (Py) Trakte stabilisieren. Hier testen wir dieses Modell mit einem IgM Pre-mRNA-Substrat, das einen gut charakterisierten Enhancer enthält. Obwohl der Enhancer für das in vitro Spleißen erforderlich war, hatten wir festgestellt, dass er keinen Einfluss auf die Bindung von U2AF65 hatte. Unerwarteterweise umging der Ersatz des natürlichen IgM Py Trakts, des Branchpoints und der 5'-Spleißstelle durch konsensbasierte Spleißsignale nicht die Anforderung des Enhancers. Diese Beobachtungen führten uns zu der Identifizierung eines neuartigen regulatorischen Elements innerhalb des IgM M2 Exons, das als Spleißinhibitor fungiert; die Entfernung des Inhibitors ermöglichte das Spleißen in Abwesenheit des Enhancers. Der IgM M2 Spleißinhibitor ist evolutionär konserviert, kann die Aktivität einer nicht verwandten, konstitutiv gespleißten Pre-mRNA hemmen und wirkt, indem er die Assemblierung des Spleißkomplexes unterdrückt. Interessanterweise bildet der Inhibitor selbst einen ATP-abhängigen Komplex, der U2 snRNP enthält. Wir schließen, dass das Spleißen der IgM Exons M1 und M2 von zwei benachbarten regulatorischen Elementen - einem Enhancer und einem Inhibitor - geleitet wird und dass eine primäre Funktion des Enhancers darin besteht, den Inhibitor zu bekämpfen.