Messung von Plasma 1,25 Dihydroxyvitamin D mit einer neuartigen Immunextraktionstechnik und Immunoassay mit jodierten Vitamin D Traceern

Wir haben einen neuartigen Assay zur Messung von 1,25 Dihydroxyvitamin D (1,25 (OH)2D) evaluiert. Die Immunextraktion von 1,25(OH)2D erfolgt mithilfe einer Mini-Säule, die einen monoklonalen Antikörper in fester Phase enthält, gefolgt von einem Radioimmunoassay (RIA) unter Verwendung eines 125I-markierten 1,25(OH)2D-Derivats und Sac-Zelltrennung. Die durchschnittliche Wiederfindung von 1,25(OH)2D3 betrug 101%, die Linearität war ausgezeichnet, die Inter- und Intra-Assay-Koeffizienten der Variation lagen bei 9, 8 und 13% sowie 11, 10 und 14% bei niedrigen, mittleren und hohen Konzentrationen von 1,25 (OH)2D3, jeweils. Die Kreuzreaktivität von Vitamin D-Metaboliten betrug < 0.0015% für 25-Hydroxyvitamin D3, 24, 25 Dihydroxyvitamin D3 und Dihydrotachysterol und 0,54% für 1 Alpha Calcitriol. Die Kreuzreaktivität von 1,25 Dihydroxyvitamin D2 betrug 79%. Die Nachweisgrenze des Assays lag bei 5 pmol/L. Der Vergleich mit einem kommerziellen Radio-Rezeptor-Assay (RRA) und einem hauseigenen RIA ergab Regressionsgleichungen von y = 0.94x + 11.8 (r = 0.98) und y = 0.91x - 1.7 (r = 0.95), jeweils, ohne wesentliche Unterschiede zwischen den Methoden in allen untersuchten Patientengruppen. Die Plasma-Konzentrationen von 1,25(OH)2D, die mit dem Assay erzielt wurden, waren wie folgt: normale, nicht supplementierte Probanden: Mittelwert 88, Bereich 48-155 pmol/L, n = 68, Patienten mit chronischer Niereninsuffizienz: Mittelwert 11, Bereich 3-36 pmol/L, n = 27, primärer Hyperparathyreoidismus: Mittelwert 198, Bereich 130-299 pmol/L, n = 23, Morbus Paget: Mittelwert 92, Bereich 42-149 pmol/L, n = 24, Osteomalazie: Mittelwert 43, Bereich 27-61 pmol/L, n = 9. Ein minimales Probenvolumen von 300 µL ist erforderlich, die praktische Zeit ist erheblich geringer als bei anderen kommerziellen Assays und das Messverfahren ist Gammazählung statt Szintillationszählung. Der Assay bietet mehrere Vorteile gegenüber früheren Methoden und sollte es mehr Laboren ermöglichen, die Messung von 1,25(OH)2D als Teil ihres Repertoires anzubieten.