Regulation der Protein-Kinase-C-Isoformen in von Phorbolestern stimulierten Jurkat-T-Lymphomzellen

Die Aktivierung der Protein-Kinase C (PKC) in T-Zellen führt zu einer Vielzahl von Reaktionen, einschließlich der Produktion von IL-2 und der Expression des IL-2-Rezeptors. PKC besteht aus mehreren Isoformen, die unterschiedliche Eigenschaften in vitro aufweisen. Wir haben ein Western-Blotting-System eingerichtet, um die Regulation der PKC-Isoformen während der T-Zell-Aktivierung zu untersuchen. In Jurkat-T-Lymphomzellen wurden PKC alpha, beta, delta, epsilon und zeta nachgewiesen. PKC alpha und beta waren hauptsächlich im Zytosol vorhanden, translozierten nach 10 Minuten Behandlung mit PMA in die Membranfraktion und verschwanden fast vollständig innerhalb von 16 Stunden. Ein größerer Anteil von PKC delta und epsilon war in der Membranfraktion vorhanden im Vergleich zu PKC alpha oder beta, und PKC epsilon translozierte schnell in die Membranfraktion. Die Translokation von PKC delta war nach 1 Stunde Behandlung mit PMA nicht offensichtlich, aber das gesamte PKC delta-Protein war innerhalb von 4 bis 6 Stunden der Behandlung reduziert. In Übereinstimmung damit führte eine Übernachtbehandlung mit PMA zur Herunterregulation sowohl von PKC delta als auch epsilon, jedoch in geringerem Maße als bei PKC beta beobachtet. Antikörper gegen PKC zeta erkannten zwei Banden bei 82 und 75 kDa. Die 75-kDa-Bande war hauptsächlich in der Zytosolfraktion vorhanden und zeigte keine Translokation oder Herunterregulation nach PMA. Wir präsentieren Beweise dafür, dass diese 75-kDa-Bande PKC zeta repräsentiert. Ähnliche PMA-induzierte Translokationsreaktionen wurden in murinen Thymozyten beobachtet, was zeigt, dass die Reaktionen nicht einzigartig für PKC-Isoformen in Jurkat sind. Diese Ergebnisse zeigen, dass es möglich ist, dass die PKC-Isoformen während der T-Zell-Aktivierung unterschiedlich reguliert werden.