Depletion von Humanem Mikro-RNA miR-125b zeigt, dass es entscheidend für die Proliferation von differenzierten Zellen, aber nicht für die Herunterregulierung vermeintlicher Zielgene während der Differenzierung ist.

Mikro-RNAs sind kleine nicht-kodierende RNAs, die die Expression von Zielgenen post-transkriptionell durch Basenpaarung mit der Ziel-mRNA regulieren. Die funktionale Charakterisierung von Mikro-RNAs wartet auf robuste experimentelle Methoden, um ein Mikro-RNA herunterzuregulieren sowie ihre Funktion in vivo zu überprüfen. Zusätzlich zur kürzlich entwickelten Methode, Mikro-RNA mit 2'-O-Methyl-Antisense-Oligonukleotiden zu sequestrieren, berichten wir, dass kleine interferierende RNAs gegen den Schleifenbereich eines Mikro-RNA-Vorläufers verwendet werden können, um die Mikro-RNA zu depletiert. Die Depletion von miR-125b durch diese Methode hatte einen tiefgreifenden Einfluss auf die Proliferation von adulten differenzierten Krebszellen, und dieser Proliferationsdefekt wurde durch ko-transfizierte reife Mikro-RNA gerettet. Diese Technik hat einzigartige Vorteile gegenüber dem 2'-O-Methyl-Antisense-Oligonukleotid und kann verwendet werden, um die Funktion von Mikro-RNA zu bestimmen, Mikro-RNAs in vivo zu assaying und den Beitrag eines vorhergesagten Mikro-RNA-Vorläufers zum Pool reifer Mikro-RNA in einer bestimmten Zelle zu identifizieren. miR-125b und let-7 Mikro-RNAs sind induziert, während ihre vermeintlichen Ziele, lin-28 und lin-41, während der in vitro-Differenzierung von Tera-2- oder embryonalen Stammzellen verringert sind. Eine experimentelle Erhöhung oder Verringerung der Mikro-RNA-Konzentrationen hatte jedoch keinen Einfluss auf die Zielgene, ein Ergebnis, das durch die Tatsache erklärt wird, dass die Herunterregulierung der Ziele hauptsächlich auf der transkriptionalen Ebene in diesen in vitro-Differenzierungssystemen zu sein scheint. Insgesamt zeigen diese Ergebnisse die Bedeutung von Strategien zur Depletion von Mikro-RNA für die direkte Bestimmung der Mikro-RNA-Funktion in vivo.