Schnelle Erkennung und Identifizierung von metallo-β-Lactamase-kodierenden Genen durch Multiplex-Real-Time-PCR-Assay und Schmelzkurvenanalyse

Metallo-beta-Lactamase-Enzyme (MbetaL) werden von übertragbaren Genen kodiert, die anscheinend schnell unter gramnegativen Bakterien verbreitet sind. Ziel dieser Studie war es, einen Multiplex-Real-Time-PCR-Assay zu entwickeln, gefolgt von einem Schmelzkurvenschritt zur schnellen Erkennung und Identifizierung von Genen, die MbetaL-Typ-Enzyme kodieren, basierend auf dem Schmelzpeak des Amplicons. Die Referenzsequenzen aller Gene, die IMP- und VIM-Typen, SPM-1, GIM-1 und SIM-1 kodieren, wurden aus GenBank heruntergeladen, und Primer wurden entworfen, um Amplicons zu erhalten, die unterschiedliche Größen und Schmelzpeak-Temperaturen (Tm) aufweisen. Der Real-Time-PCR-Assay war in der Lage, alle MbetaL-haltigen klinischen Isolate nachzuweisen, und die den Tm zugeordneten Genotypen stimmten zu 100 % mit früheren Sequenzierungsergebnissen überein. Dieser Assay könnte für die Identifizierung von MbetaL-produzierenden gramnegativen Bakterien durch molekulardiagnostische Labore geeignet sein.