Biosynthese von Enterobactin in Escherichia coli: Isochorismat-Lyase (EntB) ist ein bifunktionales Enzym, das von EntD phosphoryltransferiert und anschließend von EntE unter Verwendung von ATP und 2,3-Dihydroxybenzoat acyliert wird.

In Escherichia coli wird das Siderophormolekül Enterobactin in Reaktion auf Eisenmangel durch die Bildung einer Amidbindung zwischen 2,3-Dihydroxybenzoat (2,3-DHB) und L-Serin sowie durch die Bildung von Esterbindungen zwischen drei solchen N-acylierte Serin-Resten synthetisiert. Wir zeigen, dass EntB, zuvor beschrieben als die Isochorismat-Lyase, die für die Produktion von 2,3-DHB erforderlich ist, ein bifunktionales Protein ist, das auch als Arylträgerprotein (ArCP) eine Rolle bei der Assemblierung von Enterobactin spielt. EntB wird in der Nähe des C-Terminus in einer Reaktion, die von EntD katalysiert wird, phosphoryl- pantetheiniliert mit einem kcat von 5 min-1 und einem Km für apo-EntB von 6,5 µM. Dieses Holo-EntB wird dann in einer Reaktion, die von EntE, zuvor beschrieben als die 2,3-DHB-AMP-Ligase, katalysiert wird, mit 2,3-DHB acyliert, mit einem kcat von 100 min-1 und einem Km von <<1 µM für Holo-EntB. Die 187 N-terminalen Aminosäuren von EntB (Isochorismat-Lyase-Domäne) sind nicht für die Reaktion von EntB mit EntD oder EntE erforderlich, wie durch die äquivalenten katalytischen Effizienzen von Voll-Längen-EntB (Reste 1-285) und der C-terminalen EntB ArCP-Domäne (Reste 188-285) als Substrate für sowohl EntD als auch EntE gezeigt wird.