May 1, 1985Open Access
Dissektion von Mycobacterium tuberculosis-Antigenen mittels rekombinanter DNA.
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Abstract
Eine rekombinante DNA-Strategie wurde systematisch verwendet, um das Genom von Mycobacterium tuberculosis auf Sequenzen zu durchsuchen, die spezifische Antigene kodieren, die durch monoklonale Antikörper nachgewiesen werden. Genomische DNA-Fragmente von M. tuberculosis mit zufällig generierten Endpunkten wurden verwendet, um eine umfangreiche lambda gt11 rekombinante DNA-Expressionsbibliothek zu konstruieren. Es wurden ausreichend viele Rekombinante erzeugt, um Einsätze zu enthalten, deren Endpunkte nahezu an jedem Basenpaar im Pathogen-Genom auftreten. Proteinantigene, die durch lineare Segmente von Pathogen-DNA spezifiziert und von dem rekombinanten Phagen von Escherichia coli produziert wurden, wurden mit monoklonalen Antikörper-Sonden untersucht. Dieser Ansatz wurde mit einer verbesserten Nachweismethode zum Isolieren von Genen kombiniert, wobei Antikörper verwendet wurden, um DNA-Sequenzen klonal zu isolieren, die die Polypeptidkomponenten von M. tuberculosis spezifizieren. Die hier beschriebene Methodik, die auch auf andere Pathogene anwendbar ist, bietet Möglichkeiten zur Entwicklung empfindlicherer und spezifischerer immunodiagnostischer und seroepidemiologischer Tests für Tuberkulose und letztendlich zur Entwicklung wirksamerer Impfstoffe.