Reinigung und Charakterisierung des Rezeptors für murinen Granulozyten-Kolonie-stimulierenden Faktor.

Ein Rezeptor für den Maus-Granulozyten-Kolonie-stimulierenden Faktor (G-CSF) wurde auf der Zelloberfläche der Maus-myeloischen Leukämiezelllinie NFS-60 gefunden. Chemische Quervernetzung des Rezeptors mit radioiodiertem G-CSF, gefolgt von Gelelektrophorese in Anwesenheit von Natriumdodecylsulfat, hat gezeigt, dass der G-CSF-Rezeptor in den NFS-60-Zellen ein einzelnes Polypeptid mit einem Molekulargewicht von etwa 100.000-130.000 ist. Der Rezeptor in der Membranfraktion der NFS-60-Zellen wurde in einer aktiven Form mit 3-(3-Cholamidopropyl)dimethylammonio-1-propanesulfonsäure solubilisiert. Der solubilisierte Rezeptor wurde etwa 100.000-fach bis nahezu Homogenität mit einem G-CSF-Affinitätsgel und Gel-Filtration auf einer Superose 12-Säule gereinigt, gemessen durch die selektive Fällung des 125I-G-CSF-Rezeptorkomplexes durch Polyethylenglykol. Der gereinigte G-CSF-Rezeptor hat zwei Klassen von Bindungseigenschaften, eine mit einer Gleichgewichtsdissoziationskonstanten (Kd) von 120-360 pM, die mit dem Kd-Wert für den Zelloberflächenrezeptor vergleichbar ist, und die andere mit einem höheren Kd-Wert von 2,6-4,2 nM. Analysen des gereinigten Rezeptors durch Ligandenblotting und Sucrose-Dichtegradientenzentrifugation zeigten, dass der Niedrigaffinitätsrezeptor das Monomer des Protein mit einem Molekulargewicht von 100.000-130.000 ist, während der Hochaffinitätsrezeptor aus Oligomeren des Proteins besteht.