Ceramide als Modulator der Endozytose

Die Auswirkungen von Ceramid-Analoga auf die Aufnahme von Markern für die Flüssigphase (Pferderettich-Peroxidase, HRP) und rezeptorvermittelte (Low-Density-Lipoprotein, LDL) Endozytose wurden in chinesischen Hamsterfibroblasten untersucht. N-Hexanoyl-D-erythro-sphingosin (C6-Cer) verringerte die Aufnahme von HRP dosisabhängig. Die Internalisierung wurde um > 40 % mit 25 µM C6-Cer im Vergleich zu Kontrollen gehemmt und war innerhalb von 5 Minuten offensichtlich. Die Internalisierung von HRP wurde auch durch andere Ceramid-Analoga und durch Behandlung mit Wirkstoffen, die die Spiegel des endogenen Ceramids (Sphingomyelinasen oder den Inhibitor der Glycosphingolipid-Synthese, 1-phenyl-2-decanoylamin-3-morpholino-1-propanol (PDMP)) erhöhen, gehemmt, jedoch nicht durch N-Hexanoyl-D-erythrosphinganine (C6-dihydro-Cer) oder Sphingosin. Die Internalisierung von LDL wurde ebenfalls durch C6-Cer in einem konzentrationsabhängigen Maß gehemmt, war jedoch weniger ausgeprägt als der Effekt auf die HRP-Internalisierung (10 % gegenüber 40 % Hemmung bei 25 µM C6-Cer), was darauf hindeutet, dass Ceramid die Flüssigphasen- und rezeptorvermittelte Endozytose unterschiedlich beeinflussen könnte. C6-Cer verlangsamte auch den Transport von HRP und LDL von Endosomen zu Lysosomen, wie durch die Analyse endozytischer Vesikel auf Percoll-Dichtegradienten untersucht, und induzierte eine Umverteilung endozytischer Organellen, bestimmt durch Fluoreszenzmikroskopie intakter Zellen mit geeigneten Markern. Dies führte zu einer verringerten Abbau von 125I-markiertem LDL in Anwesenheit von C6-Cer. Diese Ergebnisse legen nahe, dass endogenes Ceramid die Endozytose modulieren könnte.