Selección de genes de housekeeping para normalización de RT-PCR en tiempo real en papa durante el estrés biótico y abiótico

Los estudios de estrés en plantas se basan cada vez más en la expresión génica. El análisis de la expresión génica requiere mediciones sensibles, precisas y reproducibles para secuencias específicas de ARNm. La RT-PCR en tiempo real es actualmente el método más sensible para la detección de ARNm de baja abundancia. Para evitar sesgos, la RT-PCR en tiempo real se refiere a uno o varios genes de control interno, que no deberían fluctuar durante los tratamientos. Aquí, se probó la no regulación de siete genes de housekeeping (beta-tubulina, ciclopilina, actina, factor de elongación 1-alfa (ef1alpha), 18S rRNA, transferasa de fosforibosilo de adenina (aprt), y proteína ribosomal citoplasmática L2) durante el estrés biótico (tizon tardío) y los estrés abióticos (estrés por frío y sal) en plantas de papa utilizando el software geNorm. Los resultados de las tres condiciones experimentales indicaron que ef1alpha fue el más estable entre los siete probados. La expresión de los otros genes de housekeeping probados varió bajo estrés. En paralelo, se realizó un estudio de la variabilidad de expresión del hsp20.2, que se ha demostrado que está implicado en el estrés por tizon tardío. La cuantificación relativa del gen hsp20.2 varió de acuerdo con el control interno y el número de controles internos utilizados, destacando así la importancia de la elección de los controles internos en tales experimentos.