El dominio de unión al receptor de la apolipoproteína E humana. Unión de fragmentos de apolipoproteína E.

Para identificar el dominio de la apolipoproteína E (apo-E) involucrado en la unión a los receptores de lipoproteína de baja densidad (LDL) en fibroblastos humanos cultivados, la apo-E fue cortada y los fragmentos fueron probados por su actividad de unión al receptor. Dos grandes péptidos trombolíticos (residuos 1-191 y 216-299) de la apo-E3 normal fueron combinados con el fosfolípido dimiristoilfosfatidilcolina (DMPC) y se probaron por su capacidad para competir con 125I-LDL por la unión a los receptores LDL (apo-B,E) en fibroblastos humanos. El dos tercios NH2-terminal (residuos 1-191) de la apo-E3 fue tan activo como la apo-E3 intacta. DMPC, mientras que el péptido más pequeño (residuos 216-299) carecía de actividad de unión al receptor. Cuando la apo-E3 fue digerida con bromuro de cianógeno (CNBr) y los cuatro fragmentos más grandes del CNBr fueron combinados con DMPC y probados, solo un fragmento compitió con 125I-LDL por la unión a fibroblastos humanos cultivados (CNBr II, residuos 126-218). Este fragmento poseía una actividad de unión similar a la de LDL humano. El complejo CNBr II . DMPC etiquetado con 125I también demostró una alta afinidad, unión saturable dependiente del calcio a membranas adrenales bovinas solubilizadas. La unión de CNBr II . DMPC fue inhibida por la modificación de residuos de arginina con ciclohexanodiona 1,2 o la modificación de residuos de lisina con diketeno. Además, el CNBr II tuvo que ser combinado con DMPC antes de que demostrara cualquier actividad de unión al receptor. El tratamiento de las membranas con pronasa abolió la capacidad de este fragmento para unirse a los receptores apo-B,E. Esta misma región básica en el centro de la molécula ha sido implicada como el dominio de unión al receptor apo-B,E no solo por este estudio sino también por otros estudios que muestran que 1) los mutantes naturales de apo-E que presentan una unión defectuosa tienen sustituciones de aminoácidos en los residuos 145, 146 o 158; y 2) el epítopo de apo-E del anticuerpo monoclonal 1D7, que inhibe la unión de apo-E, está centrado alrededor de los residuos 139-146.