Establecimiento de líneas de ratón reportero condicional en el locus ROSA26 para el imagenología de células vivas

Se estableció una serie de líneas de ratón reportero condicional en las que organelas específicas fueron etiquetadas con proteínas fluorescentes. Se estudió la localización subcelular e intensidad de 28 construcciones de proteínas de fusión fluorescentes en líneas celulares, y se seleccionaron 16 construcciones para generar líneas de ratón. Los cDNAs de fusión se insertaron en el locus genómico ROSA26 junto a las secuencias de paro flanqueadas por loxP, de modo que las proteínas fluorescentes se expresaran bajo la maquinaria transcripcional ubicua de ROSA26 cuando las secuencias loxP se recombinaran con Cre. La localización subcelular y la intensidad del producto de fusión en cada línea de ratón reportero se examinaron expresándolos de manera ubicua en embriones de E7.5. Se encontraron doce líneas reporteras, que marcan el núcleo, mitocondrias, aparato de Golgi, membrana plasmática, microtúbulo, filamento de actina y adhesión focal, adecuadas para el imagenología en vivo. Se demostró una doble tinción distinta para el núcleo y la membrana plasmática o el aparato de Golgi; se obtuvieron imágenes claras en tiempo real para núcleos y membranas plasmáticas; se confirmó la expresión condicional en las líneas Lyn-Venus y H2B-mCherry en la notocorda con Not-Cre.