Validation et optimisation de la quantification du glutathion réduit dans les érythrocytes par une méthode analytique de chromatographie liquide haute performance coulométrique.

Résumé Le glutathion (GSH), un tripeptide composé de cystéine, de glutamate et de glycine, est présent dans tous les tissus mammifères à l'échelle millimolaire. En plus d'avoir diverses fonctions cellulaires, le GSH est un important antioxydant et est considéré comme un biomarqueur précieux pour évaluer le stress oxydatif. Cet article présente une méthode analytique sensible utilisant la HPLC‐ECD pour quantifier le GSH dans les érythrocytes, validée selon les lignes directrices de l'ICH pour la validation des méthodes bioanalytiques. La préparation de l'échantillon a été optimisée par filtration centrifuge et l'utilisation d'un tampon phosphate hypotonique pour extraire le GSH des érythrocytes. Les paramètres de HPLC‐ECD ont été ajustés pour permettre une séparation rapide, en phase inversée et isocratique en 10 minutes. La réponse du détecteur était linéaire entre 0,3 et 9,5 μg/mL avec un coefficient de régression satisfaisant et une LOQ de 0,11 μg/mL. La répétabilité intra- et inter-jours variait entre 1,10 % et 8,57 % avec des récupérations allant de 94,3 % à 106,0 %. L'intégrité de dilution, la stabilité en banquise, le cycle de congélation–décongélation et la stabilité à long terme ont été examinés. Les échantillons étaient stables jusqu'à 6 mois à −80°C. Cette méthode a une bonne réponse linéaire et est répétable, précise et exacte. Elle minimise l'auto-oxydation du GSH en utilisant un filtre centrifuge lors de la préparation de l'échantillon, au lieu d'une acidification. Par conséquent, cette méthode analytique est adaptée pour quantifier le GSH dans les érythrocytes en tant que marqueur du stress oxydatif.