Un essai de priming des cellules T CD8 in vitro permet la sélection d'épithopes pour les vaccins contre le virus de l'hépatite C

Pour la conception rationnelle de vaccins spécifiques aux épitopes, l'identification des épitopes pouvant être traités et présentés est essentielle. Comme la prédiction d'épithopes basée sur des algorithmes est souvent discordante avec les épitopes CD8+ T-cell réellement reconnus, nous avons développé un protocole de priming des cellules T CD8 in vitro pour permettre l'identification des épitopes HLA de classe I véritablement et fonctionnellement exprimés. L'essai a été établi et validé pour identifier les épitopes présentés par des cellules infectées par le virus de l'hépatite C (VHC). Le priming in vitro des cellules T CD8 naïves a été réalisé en cultivant des PBMC non fractionnés en présence d'un cocktail spécifique de facteurs de croissance et de cytokines, puis en exposant les cellules à des cellules hépatiques exprimant la protéine NS3 du VHC. Après une co-culture de 10 jours, des réponses T-cell spécifiques au VHC ont été identifiées sur la base de l'analyse IFN-γ ELISpot. Pour cela, les cellules T ont été restimulées avec de longs peptides synthétiques (SLP) couvrant toute la séquence de la protéine NS3, permettant l'identification de la spécificité au VHC. Nous avons démontré que ce protocole a abouti au priming in vitro de précurseurs naïfs en cellules T expérimentées spécifiques pour 11 des 98 SLP testés. Ces 11 SLP contiennent 12 épitopes différents restreints par HLA-A*02:01, comme prédit par une combinaison de trois algorithmes de prédiction d'épithopes. De plus, nous avons identifié des réponses contre 3 peptides qui n'étaient pas prédites pour contenir des épitopes HLA de classe I immunogènes, mais qui ont montré des réponses spécifiques au VHC in vitro. La séparation des cellules T CD8+ et CD8− des PBMC primées in vitro a montré des réponses uniquement lors de la restimulation avec de courts peptides. Nous avons établi une méthode in vitro qui permet d'identifier les épitopes HLA de classe I résultant d'antigènes présentés par croisement et qui peut croiser le priming des cellules T, permettant ainsi la sélection efficace d'épithopes immunogènes fonctionnels, mais aussi moins immunogènes, pour la conception de vaccins thérapeutiques sur mesure contre les infections virales persistantes et les antigènes tumoraux.