Une méthode chimique pour la détection rapide et sensible de la synthèse de l'ADN in vivo

Nous avons développé une méthode pour détecter la synthèse de l'ADN dans les cellules proliférantes, basée sur l'incorporation de 5-éthynyl-2'-désoxyuridine (EdU) et sa détection ultérieure par un azide fluorescent à travers une réaction de cycloaddition 3 + 2 catalysée par Cu(I) (chimie "click"). La détection de l'étiquette EdU est très sensible et peut être réalisée en quelques minutes. La petite taille des azides fluorescents utilisés pour la détection permet une forte pénétration dans les spécimens, ce qui permet la coloration de préparations en monture totale de grands tissus et organes. Contrairement au BrdU, la méthode ne nécessite pas de fixation des échantillons ni de dénaturation de l'ADN et permet une bonne préservation de la structure. Nous démontrons l'utilisation de la méthode dans des cellules cultivées et dans l'intestin et le cerveau d'animaux entiers.